Léptéknövelt fehérje expresszió (PRESS)
A projekt célja:
A fehérjekutatók gyakran szembesülnek azzal, hogy az általuk kutatott fehérje expressziója az E.coli gazdaszervezetben nagyon alacsony és így még a teljes rendelkezésükre álló rázottlombikos kapacitásuk (tipikusan 3-5 liter) sem elegendő, hogy elő tudják állítani a szükséges mennyiségű fehérjét (tipikusan 50-120 mg).
Az MTA Med-In-Prot közösség Tavaszi Lendület pályázatán arra kaptunk támogatást, hogy egy léptéknövelt fehérje-expressziós szolgáltatást alakítsunk ki. A szolgáltatás lényege, hogy optimalizálás nélkül extenzív módon megnöveljük (20 – 200 literre) az adott kutató által kialakított rázottlombikos eljárás térfogatát, így arányosan több, 20x – 200x több fehérjéhez jut a kutató projektje. Kimarad egy számára érdektelen, időt rabló, más tudást igénylő munka (a technológia optimalizálás), és rögtön a számára fontos projekt-részletekkel tud foglalkozni, pl. fehérje kristályosítás, kölcsönhatások vizsgálata más fehérjékkel vagy kismolekulákkal, stb.
E projekt keretében demonstráltuk, hogy az egyszerű léptéknövelés egy gyors, hasznos és elérhető módja a rosszul expresszálódó fehérjék előállításának, a sejtek feltárásának, és a fehérje részleges előtisztításának, ez utóbbi a gazdasejt fehérjéktől való kromatográfiás elválasztását jelenti.
A fehérjekutatók gyakran szembesülnek azzal, hogy az általuk kutatott fehérje expressziója az E.coli gazdaszervezetben nagyon alacsony és így még a teljes rendelkezésükre álló rázottlombikos kapacitásuk (tipikusan 3-5 liter) sem elegendő, hogy elő tudják állítani a szükséges mennyiségű fehérjét (tipikusan 50-120 mg).
Az MTA Med-In-Prot közösség Tavaszi Lendület pályázatán arra kaptunk támogatást, hogy egy léptéknövelt fehérje-expressziós szolgáltatást alakítsunk ki. A szolgáltatás lényege, hogy optimalizálás nélkül extenzív módon megnöveljük (20 – 200 literre) az adott kutató által kialakított rázottlombikos eljárás térfogatát, így arányosan több, 20x – 200x több fehérjéhez jut a kutató projektje. Kimarad egy számára érdektelen, időt rabló, más tudást igénylő munka (a technológia optimalizálás), és rögtön a számára fontos projekt-részletekkel tud foglalkozni, pl. fehérje kristályosítás, kölcsönhatások vizsgálata más fehérjékkel vagy kismolekulákkal, stb.
E projekt keretében demonstráltuk, hogy az egyszerű léptéknövelés egy gyors, hasznos és elérhető módja a rosszul expresszálódó fehérjék előállításának, a sejtek feltárásának, és a fehérje részleges előtisztításának, ez utóbbi a gazdasejt fehérjéktől való kromatográfiás elválasztását jelenti.
Németh Áron - Ivanics Balázs - Ballagi András